Purificação e Caracterização de Proteínas

Área científica predominante do curso:

Bioquímica e Biofísica

Responsável

Alice S. Pereira | Sofia R. Pauleta

Breve descrição:

O curso aborda os princípios e técnicas de purificação e caracterização de proteínas, desde as suas propriedades físico-químicas, estrutura e funções biológicas, até as técnicas avançadas de cromatografia e ensaios bioquímicos. A produção de proteínas recombinantes é, também, descrita.

Visão Geral do Curso:

O curso oferece uma visão abrangente sobre proteínas, desde a sua estrutura e propriedades até as técnicas de purificação e caracterização mais avançadas.

Abordando, também, a produção de proteínas recombinantes e sua modificação por aplicação de técnicas de Biologia Molecular e mutagénese, suas aplicações na indústria, o curso fornecerá conhecimentos teóricos e práticos sólidos, dotando os participantes de valências para aplicar em diversas áreas, como investigação, desenvolvimento, produção e controlo de qualidade.

No final os participantes terão:  

• aprofundado os seus conhecimentos sobre técnicas de produção, purificação e caracterização de proteínas;
• experiência prática hands-on em laboratório;
• contactado com investigadores da área;
• a oportunidade de realizar networking com outros participantes e investigadores especializados.

Conteúdos do Curso

O curso integra vários módulos lecionados em regime híbrido, num total de 28 h:

1. Estrutura e função de proteínas
2. Proteínas recombinantes
3. Estratégias de purificação e fluxogramas gerais de processos de purificação de proteínas
4. Lise celular e métodos de extração
5. Fracionamento celular
6. Aplicação de cromatografias líquidas na purificação de proteínas: cromatografia de permuta iónica, exclusão molecular e de afinidade
7. Avaliação da eficiência de separação: SDS-PAGE e PAGE, espectroscopia de UV/Visível, ensaios cinéticos
8. Caracterização bioquímica de proteínas: análise da estabilidade, folding, massa molecular
9. Elaboração de um relatório científico

Corpo Docente

Alice S. Pereira, Carlos Salgueiro, Pedro Tavares, Sofia R. Pauleta, Teresa Catarino, entre outros especialistas no tópico da secção de Bioquímica e Biofísica do departamento de Química da NOVA FCT.

Objetivos do Curso

1. Compreender a estrutura e as propriedades das proteínas:

• Níveis de estrutura e propriedades físico-químicas
• Interações intermoleculares
• Solubilidade, ponto isoelétrico e carga

2. Entender as técnicas de purificação de proteínas:

• Centrifugação, precipitação e filtração
• Cromatografia em coluna (diversas técnicas)
• Eletroforese e diálise

3. Conhecer o processo de produção de proteínas recombinantes:

• Escolha do sistema de expressão e vetor de expressão; indução da expressão
• Fracionamento celular
• Purificação da proteína recombinante

4. Controlo de qualidade e caracterização da proteína purificada:

• Eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE e SDS-PAGE)
• Espectroscopia de UV/visível
• Cromatografia de exclusão molecular
• Ensaios bioquímicos/enzimáticos

Adicionalmente, espera-se que ao longo do curso os participantes desenvolvam:

• Capacidade de análise crítica e resolução de problemas;
• Competências para a redação de um relatório científico;
• Consciência da importância da purificação e caracterização de proteínas e suas aplicações.

Destinatários

• Estudantes de pós-graduação em áreas da Bioquímica, Biotecnologia, Biologia Molecular, Química e áreas afins;
• Profissionais e investigadores de áreas da Bioquímica, e afins;

 Os candidatos têm de ter pelo menos 23 anos de idade.

Coordenação

• Alice S. Pereira – https://ucibio.pt/people/alice-s-pereira
• Carlos Salgueiro – https://ucibio.pt/people/carlos-salgueiro
• Pedro Tavares – https://ucibio.pt/people/pedro-tavares
• Sofia R. Pauleta – https://ucibio.pt/people/sofia-pauleta  
• Teresa Catarino – https://novaresearch.unl.pt/en/persons/maria-teresa-nunes-mangas-catarino

Avaliação

• Sem avaliação (serão disponibilizados comentários sobre o relatório científico).